酶(mei)標分(fen)析(xi)儀(yi)檢(jian)測三(san)聚氰胺(an)殘(can)留量的方法(fa)。用(yong)提取(qu)液將(jiang)樣(yang)品(pin)中(zhong)三(san)聚氰胺(an)均質振(zhen)蕩提取(qu)。首先(xian)將(jiang)三(san)聚氰胺(an)酶標記(ji)物、樣(yang)品(pin)提取(qu)液和(he)標準品(pin)加入塗有(you)三(san)聚氰胺(an)抗體(ti)的(de)微(wei)孔(kong)開始(shi)反應。在30分(fen)鐘的孵育(yu)過程(cheng)中(zhong)，樣(yang)品(pin)提取(qu)液中(zhong)的三(san)聚氰胺(an)與三(san)聚氰胺(an)酶標記(ji)物競爭，與(yu)微(wei)孔(kong)中(zhong)的三(san)聚氰胺(an)抗體(ti)結(jie)合。孵育(yu)30分(fen)鐘後(hou)，微(wei)孔(kong)中(zhong)所有(you)未結(jie)合的三(san)聚氰胺(an)和三(san)聚氰胺(an)酶標記(ji)物都(dou)被沖(chong)洗掉(diao)。用(yong)去(qu)離(li)子水(shui)洗滌後(hou)，在每孔(kong)中(zhong)加入壹種清晰(xi)的(de)底(di)物溶液(ye)，結合酶標分(fen)析(xi)儀(yi)標記(ji)將(jiang)無(wu)色(se)底(di)物轉化(hua)為(wei)藍色(se)物質。孵育(yu)30分(fen)鐘後(hou)停止(zhi)反應，根(gen)據各(ge)孔(kong)顏(yan)色(se)深(shen)度讀(du)取(qu)數(shu)據(ju)。根據(ju)標準顏(yan)色(se)，得到(dao)樣(yang)品(pin)中(zhong)三(san)聚氰胺(an)的濃(nong)度值(zhi)。
壹、酶標儀(yi)檢(jian)測嬰(ying)兒奶(nai)粉(fen)中(zhong)三(san)聚氰胺(an)所需準(zhun)備(bei)的材(cai)料(liao)：
1、蒸餾(liu)水(shui)或(huo)去(qu)離(li)子水(shui)
2、可(ke)吸(xi)取(qu)50ul和(he)100ul的(de)移液器及(ji)吸(xi)頭(tou)
3、4000轉離(li)心機
4、吸(xi)水(shui)紙(zhi)或(huo)相當的吸(xi)水(shui)材(cai)料(liao)
5、450nm的(de)酶標儀(yi)
6、計時器
7、20mM PBS：需(xu)自行(xing)配制
8、清(qing)洗液(ye)：需(xu)自行(xing)配制
二(er)、酶標儀(yi)檢(jian)測嬰(ying)兒配方(fang)奶(nai)粉(fen)中(zhong)三(san)聚氰胺(an)試(shi)劑配制：
1、20mM PBS： 0.62g NaH2PO4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl，蒸餾(liu)水(shui)定容(rong)至1000ml
2、清(qing) 洗 液(ye)： 0.62g NaH2PO4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl，蒸餾(liu)水(shui)定容(rong)至1000ml.+0.5ml 土(tu)溫(wen)20
3、樣(yang)品(pin)萃取(qu)液：稱(cheng)85g氯(lv)化鈉(na)定容(rong)到1L，搖勻(yun)，取(qu)出25ml加入25ml蒸餾(liu)水(shui)，再(zai)加入50ml **** 甲(jia)醇(chun)，搖勻(yun)
4、樣(yang)品(pin)稀(xi)釋液(ye)：0.31g磷(lin)酸二氫鈉(na)加上2.87g的(de)磷(lin)酸氫二鈉(na)定容(rong)到1L，加入100ul吐(tu)溫(wen)20，搖勻(yun)
三(san)、酶(mei)標儀(yi)檢(jian)測嬰(ying)兒配方(fang)奶(nai)粉(fen)中(zhong)三(san)聚氰胺(an)樣(yang)品(pin)的(de)前(qian)處(chu)理(li)：
嬰(ying)兒配方(fang)奶(nai)粉(fen)（稀釋(shi)倍(bei)數(shu)：15）
1、稱(cheng)2g奶(nai)粉(fen)，加入6ml樣(yang)品(pin)萃取(qu)液，混勻；
2、4000轉離(li)心5min；
3、取(qu)0.2ml上(shang)清液加入到0.8ml樣(yang)品(pin)稀(xi)釋液(ye)中(zhong)稀釋(shi)5倍(bei)；
4、取(qu)150ul測定；
四(si)、酶標儀(yi)測定嬰(ying)幼兒(er)配方(fang)奶(nai)粉(fen)中(zhong)三(san)聚氰胺(an)的步(bu)驟(zhou):
1. 將(jiang)所有(you)試(shi)劑和(he)樣(yang)品(pin)放回(hui)室(shi)溫(wen)20-28℃，但(dan)時間不要(yao)超過24小時(shi);
2. 從(cong)鋁(lv)箔袋中(zhong)取(qu)出所需數(shu)量的微(wei)孔(kong)條(tiao)，固(gu)定在微(wei)孔(kong)板架(jia)上(shang)，將未使用(yong)的微(wei)孔(kong)條(tiao)與(yu)幹燥劑壹起放入密封袋中(zhong)存放;
3.用(yong)吸(xi)管將(jiang)150ul標準品(pin)和(he)樣(yang)品(pin)吸(xi)入相應的(de)微(wei)孔(kong)。確保(bao)每壹種溶液都(dou)是用(yong)幹凈的吸(xi)管來(lai)繪制的(de)，以避免(mian)交叉汙染。加入每孔(kong)加入50ul三(san)聚氰胺(an)酶標記(ji)物;
4. 輕輕(qing)搖動(dong)盤子60秒，20-28攝氏度孵育(yu)30分(fen)鐘;
5. 將微(wei)孔(kong)中(zhong)的溶(rong)液倒(dao)入水(shui)槽中(zhong)，將清(qing)洗液(ye)填(tian)滿(man)微(wei)孔(kong)，搖勻(yun)丟棄(qi)，重(zhong)復(fu)三(san)次(ci)，共四次(ci)清(qing)洗盤(pan)子;
6. 清洗壹次後(hou)，將溶(rong)液倒(dao)進孔(kong)中(zhong)，然(ran)後(hou)翻轉微(wei)孔(kong)板，在吸(xi)水(shui)紙(zhi)上輕(qing)拍幹燥;
7. 每個(ge)微(wei)孔(kong)加入100ul底(di)物溶液(ye);
8. 20-28℃孵育(yu)30分(fen)鐘;
9. 每個(ge)微(wei)孔(kong)加入100ul停止(zhi)液;
10. 用(yong)酶標儀(yi)在450nm下讀板
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