使用(yong)酶標(biao)儀檢測雞蛋中三聚(ju)氰胺(an)的(de)操作(zuo)方法

1、蒸餾(liu)水或去離(li)子水

2、可吸取50ul和(he)100ul的(de)移液器(qi)及(ji)吸(xi)頭

3、4000轉離(li)心(xin)機(ji)

4、吸水紙或相當的(de)吸水材料(liao)

5、450nm的(de)酶標(biao)儀

6、計(ji)時(shi)器

7、20mM PBS：需自(zi)行(xing)配(pei)制(zhi)

8、清洗液：需(xu)自(zi)行(xing)配(pei)制(zhi)

二(er)、酶(mei)標儀檢測雞蛋中三聚(ju)氰胺(an)試(shi)劑配(pei)制(zhi)：

1、20mM PBS： 0.62g NaH2PO4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl，蒸餾(liu)水定容至1000ml

2、清(qing) 洗 液： 0.62g NaH2PO4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl，蒸餾(liu)水定容至1000ml.+0.5ml 土溫20

三、酶標(biao)儀檢測雞蛋中三聚(ju)氰胺(an)樣(yang)品(pin)的(de)前(qian)處理(li)：    雞蛋（稀(xi)釋(shi)倍數：5）

1、稱1g混合好(hao)的(de)全蛋，加(jia)入(ru)5ml的(de)10%甲(jia)醇/20Mmpbs，震蕩(dang)2min；

2、4000轉離(li)心(xin)5min；

3、取2ml 上(shang)清液加(jia)入(ru)2ml異辛烷(wan)：氯仿（2：3），混勻；

4、4000轉離(li)心(xin)5min，取上(shang)層150ul測定。

四、酶(mei)標(biao)儀檢測雞蛋中三聚(ju)氰胺(an)的(de)測定過(guo)程:

1. 將(jiang)所有試(shi)劑和(he)樣(yang)品(pin)放(fang)回(hui)室(shi)溫20-28℃，但(dan)時(shi)間(jian)不(bu)要(yao)超(chao)過(guo)24小(xiao)時;

2. 從(cong)鋁(lv)箔袋(dai)中取(qu)出所需數量的(de)微孔(kong)條，固定在(zai)微孔(kong)板架上，將(jiang)未(wei)使用(yong)的(de)微孔(kong)條與幹燥(zao)劑(ji)壹(yi)起(qi)放入(ru)密封(feng)袋(dai)中存(cun)放(fang);

3.用(yong)吸管將(jiang)150ul標(biao)準品(pin)和(he)樣(yang)品(pin)吸(xi)入(ru)相應(ying)的(de)微孔(kong)。確(que)保每(mei)壹種(zhong)溶液都(dou)是用(yong)幹凈的(de)吸管來(lai)繪制(zhi)的(de)，以避(bi)免交叉(cha)汙染。加(jia)入(ru)每(mei)孔加(jia)入(ru)50ul三聚(ju)氰胺(an)酶標(biao)記(ji)物(wu);

4. 輕輕搖動盤(pan)子60秒(miao)，20-28攝(she)氏度(du)孵(fu)育(yu)30分(fen)鐘;

5. 將(jiang)微(wei)孔中的(de)溶液倒(dao)入(ru)水槽(cao)中，將(jiang)清(qing)洗液填(tian)滿(man)微(wei)孔(kong)，搖勻丟棄(qi)，重(zhong)復(fu)三次，共(gong)四次清洗盤(pan)子;

6. 清洗壹(yi)次後，將(jiang)溶液倒(dao)進(jin)孔(kong)中，然(ran)後(hou)翻轉微(wei)孔(kong)板，在(zai)吸水紙上輕拍(pai)幹(gan)燥(zao);

7. 每(mei)個(ge)微孔(kong)加(jia)入(ru)100ul底物(wu)溶液;

8. 20-28℃孵(fu)育(yu)30分(fen)鐘;

9. 每(mei)個(ge)微孔(kong)加(jia)入(ru)100ul停(ting)止液;

10. 用(yong)萊恩(en)德酶(mei)標(biao)儀在(zai)450nm下讀(du)板。