酶聯(lian)吸附(fu)法(fa)測(ce)定(ding)三聚氰胺殘(can)留(liu)量(liang)的(de)方法(fa)。用提(ti)取(qu)液將(jiang)樣(yang)品(pin)中三聚(ju)氰胺均(jun)質振(zhen)蕩(dang)提(ti)取**。首(shou)先將三聚(ju)氰胺酶標記(ji)物、樣品(pin)提(ti)取(qu)液和(he)標準(zhun)品(pin)加(jia)入(ru)塗(tu)有(you)三聚氰胺抗(kang)體的微(wei)孔開(kai)始反應。在30分鐘的(de)孵(fu)育過程(cheng)中，樣品(pin)提(ti)取(qu)液中的三(san)聚氰胺與三聚氰胺酶標記(ji)物競爭(zheng)，與微(wei)孔中的三(san)聚氰胺抗(kang)體結合。孵(fu)育30分(fen)鐘(zhong)後(hou)，微(wei)孔中所(suo)有(you)未(wei)結合的(de)三聚氰胺和三(san)聚氰胺酶標記(ji)物都被(bei)沖洗掉(diao)。用去(qu)離(li)子水(shui)洗(xi)滌後(hou)，在(zai)每孔中加(jia)入(ru)壹種清(qing)晰(xi)的底(di)物溶(rong)液，結合酶標記(ji)將無(wu)色底物轉化(hua)為(wei)藍(lan)色物質。孵(fu)育30分(fen)鐘(zhong)後(hou)停(ting)止反應，根據(ju)各孔顏色讀取(qu)數據(ju)。根(gen)據(ju)標(biao)準(zhun)顏色，得到(dao)樣品(pin)中三聚(ju)氰胺的濃(nong)度值。
壹、酶標檢(jian)測(ce)儀檢(jian)測(ce)飼料(liao)中三聚(ju)氰胺所(suo)需的材(cai)料(liao):
1. 蒸餾(liu)水(shui)或(huo)去離(li)子水(shui)
2. 可以吸收50ul和(he)100ul的移(yi)液(ye)器(qi)和(he)吸頭(tou)
3.4000轉離(li)心(xin)
4. 吸水(shui)性(xing)紙(zhi)或(huo)同(tong)等(deng)的吸水(shui)性(xing)材(cai)料(liao)
5. 450海裏(li)標
6. 計時器(qi)
7. 20mM PBS:自(zi)備
8. 清(qing)洗液:需自備(bei)
二(er)、酶標檢(jian)測(ce)儀檢(jian)測(ce)飼料(liao)中的三(san)聚氰胺試(shi)劑配(pei)制：
1、20mM PBS： 0.62g NaH2PO4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl，蒸餾(liu)水(shui)定(ding)容至1000ml
2、清 洗 液： 0.62g NaH2PO4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl，蒸餾(liu)水(shui)定(ding)容至1000ml.+0.5ml 土溫(wen)20
三、酶標檢(jian)測(ce)儀檢(jian)測(ce)飼料(liao)中的三(san)聚氰胺樣品(pin)的(de)前(qian)處理(li)： 飼料(liao)（稀釋(shi)倍數：20）
1、稱1g飼料(liao)樣品(pin)，加(jia)入(ru)4ml甲醇；
2、震蕩(dang)1min，加(jia)入(ru)0.1g氯化(hua)鈉；
3、4000轉離(li)心(xin)5min；
4、取上(shang)清(qing)液(ye)0.2ml加(jia)入(ru)到(dao)0.8ml的20mMPBS中，混(hun)勻；
5、取150ul測(ce)定(ding)。
四、酶標檢(jian)測(ce)儀檢(jian)測(ce)飼料(liao)中三聚(ju)氰胺的過程(cheng):
1. 將所(suo)有(you)試(shi)劑和(he)樣品(pin)放(fang)回(hui)室溫(wen)20-28℃，但時(shi)間不要超(chao)過24小(xiao)時(shi);
2. 從鋁箔(bo)袋中取出(chu)所(suo)需數量(liang)的(de)微(wei)孔條，固定(ding)在微(wei)孔板架(jia)上(shang)，將(jiang)未(wei)使(shi)用的(de)微(wei)孔條與幹燥(zao)劑壹起放入密(mi)封(feng)袋中存(cun)放;
3.用吸管(guan)將150ul標(biao)準品(pin)和(he)樣(yang)品(pin)吸入相(xiang)應的微(wei)孔。確保每(mei)壹種溶(rong)液都是用幹(gan)凈(jing)的(de)吸管(guan)來(lai)繪(hui)制(zhi)的(de)，以(yi)避(bi)免(mian)交叉汙(wu)染。加(jia)入(ru)
每(mei)孔加(jia)入(ru)50ul三(san)聚(ju)氰胺酶標記(ji)物;
4. 輕輕(qing)搖(yao)動盤子(zi)60秒(miao)，20-28攝氏度孵育30分(fen)鐘(zhong);
5. 將微(wei)孔中的溶(rong)液倒入(ru)水(shui)槽中，將清(qing)洗液(ye)填滿(man)微(wei)孔，搖(yao)勻丟棄(qi)，重(zhong)復三(san)次，共四次清(qing)洗盤(pan)子(zi);
6. 清(qing)洗(xi)壹次後(hou)，將(jiang)溶(rong)液倒進孔中，然(ran)後(hou)翻轉微(wei)孔板，在(zai)吸水(shui)紙(zhi)上(shang)輕(qing)拍(pai)幹(gan)燥(zao);
7. 每(mei)個(ge)微(wei)孔加(jia)入(ru)100ul底(di)物溶(rong)液;
8. 20-28℃孵育30分(fen)鐘(zhong);
9. 每個(ge)微(wei)孔加(jia)入(ru)100ul停(ting)止(zhi)液;
10. 用萊(lai)恩(en)德酶標檢(jian)測(ce)儀在(zai)450nm下讀板
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