酶(mei)標測定儀(yi)檢測(ce)生鮮(xian)乳(ru)中三(san)聚氰(qing)胺殘留(liu)的步驟(zhou)
作者：admin 時(shi)間(jian)：2021-05-19 02:08:03 點(dian)擊(ji)次數(shu):5568
酶(mei)聯(lian)吸附法測(ce)定生鮮乳(ru)中三(san)聚氰(qing)胺殘留(liu)量(liang)的方法。用(yong)提取液將(jiang)樣品中三(san)聚氰(qing)胺均(jun)質振(zhen)蕩(dang)提取。首(shou)先(xian)將(jiang)三(san)聚氰(qing)胺酶(mei)標記(ji)物(wu)、樣品提取液和標準品加入(ru)塗有三(san)聚氰(qing)胺抗(kang)體的微孔(kong)開(kai)始反(fan)應。在(zai)30分鐘(zhong)的孵育過(guo)程(cheng)中，樣品提取液中的三(san)聚氰(qing)胺與三(san)聚氰(qing)胺酶(mei)標記(ji)物(wu)競爭(zheng)，與微孔(kong)中的三(san)聚氰(qing)胺抗(kang)體結(jie)合。孵(fu)育30分鐘(zhong)後(hou)，微孔(kong)中所有未(wei)結合(he)的三(san)聚氰(qing)胺和三(san)聚氰(qing)胺酶(mei)標記(ji)物(wu)都被(bei)沖洗(xi)掉。用(yong)去(qu)離子(zi)水(shui)洗(xi)滌(di)後，在(zai)每(mei)孔(kong)中加入(ru)壹種(zhong)清(qing)晰的底物(wu)溶(rong)液，結合(he)酶(mei)標儀(yi)將(jiang)無色底物(wu)轉(zhuan)化(hua)為(wei)藍(lan)色物(wu)質(zhi)。孵育(yu)30分鐘(zhong)後(hou)停(ting)止反應，根(gen)據(ju)各(ge)孔(kong)顏(yan)色深度讀取數(shu)據(ju)。根(gen)據(ju)標準顏色，得到樣品中三(san)聚氰(qing)胺的濃度值。
壹、酶(mei)標儀(yi)檢測(ce)原料(liao)奶中三(san)聚氰(qing)胺需要(yao)準備(bei)的材料(liao):
1. 蒸(zheng)餾(liu)水(shui)或去(qu)離子(zi)水(shui)
2. 可以(yi)吸收50ul和(he)100ul的移(yi)液器和吸頭
3.4000轉(zhuan)離心
4. 吸水(shui)性紙或(huo)同(tong)等的吸水(shui)性材料(liao)
5. 450海裏標
6. 計(ji)時(shi)器
7. 20mM PBS:自備(bei)
8. 清(qing)洗(xi)液:需自(zi)備(bei)
二、酶(mei)標儀(yi)檢測(ce)原料(liao)奶中三(san)聚氰(qing)胺試劑的制備(bei):
1. 20mM PBS: 0.62g na2po4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl，蒸(zheng)餾(liu)水(shui)使(shi)體積(ji)至(zhi)1000ml
2. 洗(xi)滌(di)溶液:0.62g na2po4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl，蒸(zheng)餾(liu)水(shui)到定容1000ml。+0.5ml土(tu)壤(rang)溫(wen)度20
三(san)、酶(mei)標儀(yi)檢測(ce)原料(liao)奶中三(san)聚氰(qing)胺樣品的預處理(li):原料(liao)奶(稀(xi)釋(shi)比:1)
1. 取鮮奶10ml，冷凍離心10分鐘(zhong)(或(huo)放入(ru)冰(bing)箱(xiang)10分鐘(zhong)，離心10分鐘(zhong));
2. 除(chu)去(qu)上層(ceng)乳(ru)脂，待樣品恢(hui)復室溫(wen)後(hou)，取下(xia)層(ceng)150ul直(zhi)接(jie)測(ce)量(liang);
四(si)、酶(mei)標檢測儀(yi)測定生奶中三(san)聚氰(qing)胺的方法:
1. 將(jiang)所有試劑和(he)樣品放回室溫20-28℃，但(dan)時(shi)間(jian)不(bu)要超過(guo)24小時;
2. 從(cong)鋁箔袋中取出所需數(shu)量(liang)的微孔(kong)條(tiao)，固(gu)定在微孔(kong)板(ban)架(jia)上，將(jiang)未使(shi)用(yong)的微孔(kong)條(tiao)與幹燥(zao)劑壹起放入(ru)密封(feng)袋中存放;
3.用(yong)吸管將(jiang)150ul標準品和樣品吸入(ru)相應的微孔(kong)。確保每(mei)壹種(zhong)溶(rong)液都是(shi)用(yong)幹凈的吸管來(lai)繪(hui)制的，以(yi)避(bi)免交(jiao)叉汙染。加入(ru)每孔(kong)加入(ru)50ul三(san)聚氰(qing)胺酶(mei)標記(ji)物(wu);
4. 輕(qing)輕(qing)搖動盤(pan)子(zi)60秒，20-28攝(she)氏(shi)度孵育(yu)30分鐘(zhong);
5. 將(jiang)微孔(kong)中的溶液倒(dao)入(ru)水(shui)槽中，將(jiang)清洗(xi)液填滿(man)微孔(kong)，搖(yao)勻棄去(qu)，重(zhong)復三(san)次，共洗(xi)盤(pan)四(si)次;
6. 清洗(xi)壹次後，將(jiang)溶液倒(dao)進(jin)孔(kong)中，然後翻(fan)轉(zhuan)微孔(kong)板(ban)，在(zai)吸水(shui)紙上輕(qing)拍幹燥(zao);
7. 每(mei)個(ge)微孔(kong)加入(ru)100ul底物(wu)溶(rong)液;
8. 20-28℃孵育(yu)30分鐘(zhong);
9. 每(mei)個(ge)微孔(kong)加入(ru)100ul停(ting)止液;
10. 用(yong)萊(lai)恩(en)德酶(mei)測定標儀(yi)在450nm下(xia)讀(du)板(ban)
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